ayudenme!

[josue_m27]

necesito saber con que metodos de laboratorio se puede saber si un alimento contiene carbohidratos (azucares) y tambien de azucares reductores.

[Katralo]

Existen varios métodos para verificar y cuantificar presencia de carbohidratos. En general, se basan en la liberación de extremos reductores. En lo personal, prefiero utilizar el método del DNS o Ácido Dinitrosalicílico, te lo detallo:

I. Agregar en el siguiente orden los reactivos
1. 1,8 mL de agua destilada o sustrato en caso de una determinación enzimática al pH requerido por la enzima.
2. 200 uL de tampón más estándar (te lo detallo más adelante) para la curva de calibración.
3. Incucar a la temperatura requerida para la determinación enzimática por 5 minutos, si sólo estás midiendo azúcares ya presentes obvia este paso.
4.200 uL de la dilución enzimática, si sólo mides azúcares ya presentes completa con tampón.
5. Incubar el tiempo requerido para la determinación enzimática, si no es el caso obvialo.
6. Agregar 3 mL de DNS (receta detallada a continuación) y calentra a baño maría por 5 minutos para desarrollo de color.
7. Esperar a que enfríe a temperatura ambiente o en agua.
8. Leer absorbancia a 540 nm

II. Preparación DNS
1.Mezclar 80 mL de NaOH al 10% con 150 mL de agua destilada
2. Agragar 150 g de tartrato de sodio y potasio tetrahidratado
3. Calentar a 50ºC y agitar constantemente
4. Agregar 5 g de DNS y agitar constantemente a 50ºC.
5. Enfriar a temperatura ambiente y filtrar.
6. Aforar a 500 mL. Guardarlo en frasco ámbar en lugar fresco y seco. El DNS preparado tiene una duración de 1 mes.
7. Hacer curva de calibración

III. Curva de calibración
1. Preparar estándar apropiado (según azúcar a determinar) 20 mM pH 7. En caso de una determinación enzimática en estándar debe estar al mismo pH que la enzima para evitar desviaciones por pH.
2. Proceder según I, pero en el paso 2 reemplazas por una cantidad cada vez más creciente de estándar, completando los 200 uL con tampón:

Vol. STD Vol. Tampón
0 200
40 160
60 140
80 120
100 100
120 80
140 60
160 40

La curva de calibración tiene una linealidad según la relación Absorbancia a 540 nm v/s Concentración estándar (STD).


Espera te sirva la información, ya me contarás.
Recibe un cordial saludo